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藥物發(fā)現(xiàn)
Drug discovery
藥物發(fā)現(xiàn)

大環(huán)肽篩選（mRNA展示技術）

mRNA展示技術是將基因型(mRNA)與表型(多肽/蛋白)融合的體外多肽/蛋白篩選技術，將肽與其編碼mRNA進行共價連接，使用嘌呤霉素作為連接物。美迪西應用此技術構建規(guī)模超過1013的mRNA展示庫，通過無細胞PURE體外翻譯系統(tǒng)將非天然氨基酸整合到多肽中，經(jīng)過對靶標蛋白的親和純化后對與多肽連接的cDNA進行測序，可精準篩選到與靶標相互作用的多肽。

mRNA展示庫的構建
  • DNA庫制備：使用分子生物學技術制備DNA庫(通常為編碼約4~14個氨基酸的環(huán)肽) DNA庫的體外轉(zhuǎn)錄：通過RNA聚合酶的作用，DNA庫被轉(zhuǎn)錄成mRNA 嘌呤霉素連接：嘌呤霉素分子通過DNA連接子序列連接到每個mRNA上，嘌呤霉素是一種抗生素，作為氨基?；膖RNA類似物(tRNA在翻譯過程中向核糖體傳遞氨基酸)，并作為mRNA和肽之間的連接子 mRNA庫的體外翻譯：mRNA-嘌呤霉素偶聯(lián)物進行體外翻譯，由核糖體翻譯生成相應的肽 線性肽的環(huán)化修飾：通過化學合成技術進行環(huán)化修飾 逆轉(zhuǎn)錄：mRNA逆轉(zhuǎn)錄形成mRNA-cDNA雙鏈，產(chǎn)生mRNA/cDNA-嘌呤霉素-肽偶聯(lián)物庫
    整個過程均在體外進行，無需依靠細胞。
體外篩選
  • 孵育與洗滌：將mRNA-cDNA-肽融合庫與固定在固體載體上的靶蛋白一起孵育，然后進行洗滌以去除未結合的肽 擴增、富集與測序：結合肽的cDNA通過PCR擴增，然后用作DNA庫模板，在進一步的重復幾輪mRNA展示庫篩選中，富集與靶蛋白高親和力的結合肽，最后通過cDNA的測序來確定多肽的結構
    環(huán)肽篩選平臺.png

    Nat Rev Chem. 2020, 4(2): 90-101. doi: 10.1038/s41570-019-0159-2.Trends Pharmacol Sci. 2021, 42(5): 385-397. doi: 10.1016/j.tips.2021.02.004.

    除了多肽藥物體外篩選，美迪西還可以提供多肽藥物的合成服務。美迪西多肽合成研究團隊長期致力于解決限制多肽藥物發(fā)展和應用的核心問題，目前已建立了從上游非天然氨基酸結構單元的合成、多肽藥物修飾和大規(guī)模合成，到下游多肽藥物信號轉(zhuǎn)導通路和作用機制研究的完善體系。
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