單B細胞抗體制備

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• 單克隆抗體(mAb)是許多診斷應(yīng)用和研究的重要工具。此外，單克隆抗體已成為許多疾病的理想治療用品，在癌癥、自身免疫性疾病和感染性疾病的治療中得到了很好的應(yīng)用。為了研究和治療目的，已有許多技術(shù)用于生成單克隆抗體。單B細胞抗體制備技術(shù)是近些年新發(fā)展的一種制備單抗的技術(shù)。該方法具有速度快、通量高、以及抗體重輕鏈可變區(qū)天然配對的優(yōu)勢，是目前新型、高效的抗體發(fā)現(xiàn)方法之一。

  

  單B細胞抗體制備的原理是每個B細胞只含有一對功能性的重鏈和輕鏈，每個B細胞具有只產(chǎn)生一種特異性抗體的特性，所以可以直接從單個B細胞中擴增出抗體基因獲得單抗。

• 單B細胞抗體制備流程

  

• 單B細胞分選

  根據(jù)研究應(yīng)用，可以隨機或抗原選擇性地從外周血或淋巴組織(如骨髓、脾臟)中分離單B細胞。對于B細胞分離，目前單B細胞分選方式有流式細胞分選法、 磁珠細胞分選法、 顯微操作法、 激光顯微切割法以及微流控分選法。 其中流式細胞熒光分選技術(shù) (Fluorescence activated Cell Sorting，F(xiàn)ACS)是目前一種成熟、 有效的單細胞分選方法。

  

• 單B細胞Ig基因轉(zhuǎn)錄,擴增,測序

  從單個B細胞中構(gòu)建互補DNA (cDNA)為同時分析表達的IgH和IgL鏈基因提供了一種正確的方法。通常，單B細胞cDNA合成是在用于細胞沉積和細胞裂解的設(shè)備中進行的(例如96孔板、納米孔芯片等)，這確保了方便處理大量樣品并將交叉污染的風險降至最低。全長Ig可變區(qū)基因轉(zhuǎn)錄物通過巢氏PCR進行擴增，其中RT-PCR產(chǎn)物可作為第一輪PCR的樣品進行進一步反應(yīng)。

  無論使用何種Ig可變區(qū)基因擴增策略，編碼抗體特異性的單B細胞Ig可變區(qū)基因轉(zhuǎn)錄信息隨后通過測序得到。然后利用各種數(shù)據(jù)庫，如NCBI的IgBLAST、IMGT，可以很容易地識別和分析重排的V、D和J基因片段是否存在突變、插入和缺失。

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