哺乳動物細胞蛋白表達系統(tǒng),具備蛋白折疊和翻譯后修飾的功能，使其蛋白更接近天然蛋白，從而獲得與天然蛋白相同的生物活性。因此使得哺乳動物細胞表達系統(tǒng)在重組蛋白藥物，特別是治療性重組單抗藥物的研發(fā)和生產(chǎn)中有最為廣泛的應用。

美迪西生物醫(yī)藥所提供的哺乳動物蛋白表達系統(tǒng)基于無血清培養(yǎng)體系提供基因表達優(yōu)化,瞬時表達,穩(wěn)定表達及抗體生產(chǎn)等多種真核蛋白服務(wù)項目。哺乳動物細胞蛋白表達服務(wù)詳情

美迪西科研人員建立了成熟的哺乳動物蛋白表達系統(tǒng)及純化服務(wù)平臺，提供哺乳動物蛋白表達系統(tǒng)的表達與純化服務(wù)。擁有CHO、HEK293、BHK、 Vero等多種表達系統(tǒng)。

• 服務(wù)項目

• 貼壁及懸浮培養(yǎng)

• 瞬轉(zhuǎn)表達篩選

• 穩(wěn)定細胞系建

Rabbit IgG expressed in transient transfected 293 cells

    Note: the condition medium was run in 10%SDS-PAGE gel and stained with coomassie blue（備注:）

    哺乳動物細胞表達系統(tǒng)的優(yōu)勢在于能夠指導蛋白質(zhì)的爭取折疊，提供復雜的N型糖基化等多種翻譯后加工功能，因而表達產(chǎn)物在分子結(jié)構(gòu)、理化特性和生物學功能方面最接近于天然的高等生物蛋白質(zhì)分子。

哺乳動物細胞蛋白表達系統(tǒng)的分類

根據(jù)目的蛋白表達的時空差異，可將表達系統(tǒng)分為瞬時、穩(wěn)定和誘導表達系統(tǒng)。
瞬時表達系統(tǒng)是指宿主細胞在導入表達載體后不經(jīng)選擇培養(yǎng)，載體DNA隨細胞分裂而逐漸丟失，目的蛋白的表達時限短暫；瞬時表達系統(tǒng)的優(yōu)點是簡潔，實驗周期短。大規(guī)模的瞬時表達技術(shù)是近年來的一個研究熱點。已有報道能放大到100L反應器中生產(chǎn)重組蛋白，產(chǎn)量（分泌型蛋白）可達1~10mg/L。不過該方法技術(shù)條件要求高，如質(zhì)粒的純度、轉(zhuǎn)染的效率等。

穩(wěn)定表達系統(tǒng)是指載體進入宿主細胞并經(jīng)選擇培養(yǎng)，載體DNA穩(wěn)定存在于細胞內(nèi)，目的蛋白的表達持久、穩(wěn)定。由于需抗性選擇甚至加壓擴增等步驟，穩(wěn)定表達相對耗時耗力。
誘導表達系統(tǒng)是指目的基因的轉(zhuǎn)錄受外源小分子誘導后才得以開放。早期實驗常使用糖皮質(zhì)激素、重金屬離子等誘導體系來調(diào)控基因表達，但存在特異性低和毒性高等諸多缺點；

表達系統(tǒng)的選擇

哺乳動物細胞表達系統(tǒng)中，重組蛋白的表達水平與許多因素相關(guān)，如轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)控元件、RNA剪接過程、mRNA穩(wěn)定性、基因在染色體上的整合位點、重組蛋白對細胞的毒性作用以及宿主細胞的遺傳特性等。選定表達系統(tǒng)之后，還需考慮表達載體與宿主細胞的合理搭配問題。因此如果需獲得一個基因的高表達。最好多試用幾種不同的載體及宿主細胞。

哺乳動物細胞蛋白表達系統(tǒng)應用領(lǐng)域

哺乳動物細胞表達系統(tǒng)已成為多種基因工程藥物的生產(chǎn)平臺。

    哺乳動物細胞表達系統(tǒng)在新基因的發(fā)現(xiàn)、蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能研究中起了極為重要的作用。

    一、穩(wěn)定表達細胞系的篩選

        1、構(gòu)建目的基因的表達載體

        2、確定受體細胞

        3、確定篩選方法（抗生素的使用濃度）

        4、轉(zhuǎn)染后48小時，串帶鋪板（1:100），加篩選藥物

        5、3-4d換液一次，直至存活細胞長出島狀細胞株，越2周

        6、克隆耐藥細胞，檢測目基因的存在與表達。

    二、哺乳動物細胞表達系統(tǒng)

        （1）宿主細胞

        （2）表達載體的構(gòu)建

        （3）表達細胞株的基因共壙增和篩選方法

        （4）可調(diào)控的哺乳動物細胞表達系統(tǒng)

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