定義：原位雜交（insituhybridization）屬于分子雜交的一種，是一種將標(biāo)記探針直接于組織或細(xì)胞中的待測核酸雜交，并結(jié)合免疫細(xì)胞化學(xué)的原理使用合適的檢測系統(tǒng)，從而對目標(biāo)核酸序列進(jìn)行精確定量定位的方法。

原位雜交術(shù)（in situ hybridization)

在研究DNA分子復(fù)制原理的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種技術(shù)。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段，在適宜的條件下，能過氫鍵結(jié)合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或RNA-RNA雙鍵分子的特點(diǎn)，應(yīng)帶有標(biāo)記的（有放射性同位素，如3H、35S、32P、熒光素生物素、地高辛等非放射性物質(zhì))DAN或RNA片段作為核酸探針,與組織切片或細(xì)胞內(nèi)待測核酸。(RNA或DNA）片段進(jìn)行雜交，然后可用放射自顯影等方法予以顯示，在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DAN的存在與定位；用原位雜交術(shù)，可在原位研究細(xì)胞合成某種多肽或蛋白質(zhì)的基因表達(dá)。 此方法有很高的敏感性和特異性，可進(jìn)一步從分子水來探討細(xì)胞的功能表達(dá)及其調(diào)節(jié)機(jī)制。已成為當(dāng)今細(xì)胞生物學(xué)、分子生物學(xué)研究的重要手段。

發(fā)展進(jìn)程：1969年P(guān)ardue和Gall最先研發(fā)了此項(xiàng)技術(shù)，當(dāng)時(shí)可用的唯一標(biāo)記物是放射性同位素，放射自顯影技術(shù)顯然成為探針序列檢測的方法。但放射性標(biāo)記探針由于安全要求措施嚴(yán)格、有效期短、顯影時(shí)間長及放射衰變引發(fā)的低分辨率等因素，原位雜交技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用大受限制。直至非放射性標(biāo)記探針的出現(xiàn)，徹底排除原位雜交中遇到的種種阻礙，使得該技術(shù)得到廣泛應(yīng)用。

方法：非放射性原位雜交技術(shù)根據(jù)標(biāo)記探針的類型分為兩種。直接檢測法（以熒光素直接標(biāo)記探針）和間接檢測法（以地高辛或生物素標(biāo)記的核苷酸作為底物，通過PCR合成標(biāo)記探針。）

原位雜交技術(shù)分類

①基因組原位雜交技術(shù)：主要是利用物種之間DNA同源性的差異，用另一物種的基因組DNA以適當(dāng)?shù)臐舛茸鞣庾?，在靶染色體上進(jìn)行原位雜交。
②熒光原位雜交技術(shù)：利用熒光標(biāo)記的核酸片段為探針，與染色體上或DNA顯微切片上的特異fl-N：~行雜交，通過熒光檢測系統(tǒng)(熒光顯微鏡)檢測信號DNA序列在染色體或DNA顯微切片上的目的DNA序列，進(jìn)而確定其雜交位點(diǎn)。
③多彩色熒光原位雜交技術(shù)：是在熒光原位雜交技術(shù)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新技術(shù)，它用幾種不同顏色的熒光素單獨(dú)或混合標(biāo)記的探針進(jìn)行原位雜交，能同時(shí)檢測多個(gè)靶位，各靶位在熒光顯微鏡下和照片上的顏色不同，呈現(xiàn)多種色彩，因而被稱為多彩色熒光原位雜交。

④原位PCR：是常規(guī)的原位雜交技術(shù)與PCR技術(shù)的有機(jī)結(jié)合，即通過PCR技術(shù)對靶核酸序列在染色體上或組織細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行原位擴(kuò)增使其拷貝數(shù)增加，然后通過原位雜交技術(shù)進(jìn)行檢測，從而對靶核酸序列進(jìn)行定性、定位和定量分析。原位PCR技術(shù)大大提高了原位雜交技術(shù)的靈敏度和專一性，可用于低拷貝甚至單拷貝的基因定位，為原位雜交技術(shù)的發(fā)展提供了更廣闊的發(fā)展前景。

以上是關(guān)于原位雜交的相關(guān)介紹，內(nèi)容來源于美迪西官網(wǎng)。

相關(guān)內(nèi)容推薦