一、技術(shù)簡(jiǎn)介：

重組腺病毒（Adenovirus）是一種目前最高效可靠的重組病毒表達(dá)系統(tǒng)之一，可用于在哺乳細(xì)胞中瞬時(shí)及高水平地表達(dá)shRNA或目的蛋白質(zhì)。
其具備以下優(yōu)點(diǎn)：
1. 宿主范圍廣：腺病毒除可感染一系列哺乳動(dòng)物細(xì)胞,除可感染幾乎所有人的細(xì)胞類型外，還可感染包括大鼠、小鼠、兔、豬、羊、猴、雞等物種。
2. 因腺病毒的感染不依賴細(xì)胞周期，故其既可以感染增殖細(xì)胞也可以感染非增殖細(xì)胞。
3. 瞬時(shí)高效表達(dá)，不整合到基因組中。
4. 病毒滴度高，可用于動(dòng)物水平的實(shí)驗(yàn)。
 
本系統(tǒng)是以Ad5血清型E1/E3缺陷型腺病毒DNA為骨架、在克隆、包裝、擴(kuò)增等各部條件做了改進(jìn)和優(yōu)化，達(dá)到了克隆陽性率更高，質(zhì)量更可靠，包裝穩(wěn)定，出毒迅速，滴度高等效果。所包裝的腺病毒已成功應(yīng)用于凋亡檢測(cè)、染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）、RT-PCR、Co-IP等科研實(shí)驗(yàn)。
 

二、實(shí)驗(yàn)步驟及周期：

1. 將目的基因插入腺病毒重穿梭質(zhì)粒中，實(shí)驗(yàn)周期為7個(gè)工作日， 如要求對(duì)載體的特定部件有所要求而需進(jìn)行特殊改造，則此步實(shí)驗(yàn)路線及實(shí)驗(yàn)周期另行規(guī)定。
2. 將目的基因轉(zhuǎn)移至腺病毒骨架中，實(shí)驗(yàn)周期為7個(gè)工作日。
3. 將確定正確的重組腺病毒質(zhì)粒在293A細(xì)胞進(jìn)行包裝，時(shí)間約為20個(gè)工作日。
4. 腺病毒擴(kuò)增和CsCl純化，實(shí)驗(yàn)周期為7個(gè)工作日。
5. 對(duì)包裝出的重組病毒進(jìn)行質(zhì)檢。
質(zhì)檢包括對(duì)終產(chǎn)品病毒基因進(jìn)行PCR和WB以確認(rèn)目的基因的存在，實(shí)驗(yàn)周期為5個(gè)工作日。
 

三、服務(wù)承諾：

1. 提供的病毒量為1ml滴度>1010VP/ml，如需更多量的病毒請(qǐng)具體再商洽。
2. 提供穿梭質(zhì)粒，重組腺病毒質(zhì)粒及相關(guān)酶切鑒定電泳圖，測(cè)序報(bào)告、終產(chǎn)物PCR或WB鑒定的實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
3. 為了確保服務(wù)質(zhì)量，合同周期為在實(shí)驗(yàn)周期的基礎(chǔ)上加10個(gè)工作日。
 

四、應(yīng)用實(shí)例：

 
Fig1:Infection efficiency of Ad-Fos in CGNs. DIV5 CGNs were infected with Ad-Fos at MOI of 100. Thirty six hours after infection phase-contrast light and fluorescent micrographs of the infected cells were visualized. The cells infected with Ad-Fos were fixed and were stained with a Flag-specific M2 antibody or without a primary antibody (-1°). Infection efficiency of adenovirus is about 80%.