近日，F(xiàn)DA更新了《人用藥物中亞硝胺雜質(zhì)控制》指南的新版本，為生物醫(yī)藥行業(yè)對(duì)于亞硝胺雜質(zhì)研究提供了更明確的指導(dǎo)。隨著全球監(jiān)管機(jī)構(gòu)針對(duì)亞硝胺雜質(zhì)的監(jiān)管力度持續(xù)加強(qiáng)，研發(fā)人員需要更加藥物安全的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，并從源頭上控制其產(chǎn)生。亞硝胺雜質(zhì)的產(chǎn)生與合成工藝路線密切相關(guān)，美迪西云講堂攜手經(jīng)驗(yàn)豐富的肜祺老師，和您一起解決探索亞硝胺雜質(zhì)分析的常見(jiàn)問(wèn)題。

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1 LC-MS儀器分析方法靈敏度是不是很能難達(dá)到要求，不能用于亞硝胺基因毒性雜質(zhì)方法開(kāi)發(fā)？

肜祺：根據(jù)實(shí)際情況，亞硝胺雜質(zhì)的檢測(cè)限度通常非常低，一般在ppm或ppb級(jí)別，對(duì)于LC-MS來(lái)說(shuō)，這樣的靈敏度要求可能超出了它的能力范圍。這時(shí)可以選擇MS-MS聯(lián)用或高分辨質(zhì)譜技術(shù)來(lái)進(jìn)行研究。

在某些情況下，如果API的日攝入量很低，且亞硝胺雜質(zhì)的限度能夠控制在100 ppm以上ppm水平，LC-MS也有可能被用來(lái)檢測(cè)亞硝胺雜質(zhì)。

2 如果沒(méi)有亞硝胺標(biāo)品的情況下如何進(jìn)行研究？

肜祺： 在LC-MS或GC-MS方法開(kāi)發(fā)過(guò)程中，針對(duì)不同亞硝胺化合物，其吸收和響應(yīng)特性是存在差異的。因此，為了確保分析的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性，開(kāi)發(fā)專屬的檢測(cè)方法是非常必要的。這通常需要亞硝胺的標(biāo)準(zhǔn)品來(lái)進(jìn)行方法的建立和驗(yàn)證。

然而，在研究過(guò)程中，如果亞硝胺的標(biāo)準(zhǔn)品難以獲得，或者通過(guò)多種嘗試仍無(wú)法得到穩(wěn)定的標(biāo)準(zhǔn)品，這可能從側(cè)面反映出在正常條件下，API中亞硝酸類雜質(zhì)的存在概率較低。在這種情況下，可以在資料中進(jìn)行詳細(xì)的描述和論證，說(shuō)明由于亞硝胺標(biāo)準(zhǔn)品難以獲得，從而推斷其產(chǎn)生的風(fēng)險(xiǎn)較低。在這個(gè)情況下，可以不必進(jìn)行深入的方法開(kāi)發(fā)。

3 IND階段就要完成亞硝胺雜質(zhì)研究嗎？

肜祺：在IND階段，對(duì)于基毒雜質(zhì)的研究，尤其是亞硝胺這類突變雜質(zhì)，現(xiàn)在大家的要求越來(lái)越嚴(yán)格和完善。對(duì)于非癌癥治療藥物，評(píng)審老師通常會(huì)要求在IND階段就開(kāi)始對(duì)突變雜質(zhì)進(jìn)行初步研究。亞硝胺雜質(zhì)由于其潛在的致癌風(fēng)險(xiǎn)，屬于ICH M7(R2)指南中提到的“關(guān)注隊(duì)列”物質(zhì)。因此，在IND階段進(jìn)行初步評(píng)估是非常必要的。
后續(xù)在NDA階段，由于工藝可能會(huì)有所調(diào)整，因此IND階段對(duì)于突變雜質(zhì)的評(píng)估可能不需要過(guò)于深入，進(jìn)行初步的評(píng)估和控制就可以。

4 亞硝胺雜質(zhì)方法開(kāi)發(fā)有沒(méi)有推薦的色譜柱?

肜祺：根據(jù)一般項(xiàng)目情況，我們通常使用標(biāo)準(zhǔn)的十八碳色譜柱來(lái)檢測(cè)亞硝胺等化合物，這些色譜柱能夠高效地分離并檢測(cè)目標(biāo)化合物。也需要根據(jù)具體項(xiàng)目的化合物的特性和分離需求，選擇最合適的色譜柱，確保分析結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。

5 如果多批樣品中檢測(cè)出10%限度以上的亞硝胺雜質(zhì)，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中亞硝胺限度是否可以按計(jì)算出的單個(gè)亞硝胺限度進(jìn)行制訂？

肜祺：若僅有1個(gè)亞硝胺雜質(zhì)檢出為10%限度以上，則可按計(jì)算出的單個(gè)亞硝胺限度設(shè)定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；若多個(gè)亞硝胺雜質(zhì)均為10%為了不超過(guò)ICH M7(R2)指南中概述的1:10萬(wàn)的可接受風(fēng)險(xiǎn)水平，有兩種方法被認(rèn)為是可接受的:
1. 所有確定的n -亞硝胺的每日總攝入量不超過(guò)確定的最敏感的n -亞硝胺的限度；
2. 所有確定的n -亞硝胺計(jì)算的總風(fēng)險(xiǎn)水平不超過(guò)十萬(wàn)分之一；
2.1 固定方法：對(duì)單個(gè)亞硝胺設(shè)定固定的限度，不需要對(duì)總n -亞硝胺設(shè)定限制。每種n-亞硝胺的限量應(yīng)按其限度的百分比設(shè)定，使每種指定亞硝胺的限度百分比總和不超過(guò)100%；
2.2 靈活方法：每種n-亞硝胺按計(jì)算出的限度設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)，并要求對(duì)總n-亞硝胺規(guī)定額外的限量為每種指定亞硝胺的限度百分比總和不超過(guò)100%。詳見(jiàn)EMA亞硝胺問(wèn)答Q10。

6 使用EP或USP的原檢測(cè)方法，方法是否可以不用驗(yàn)證？

肜祺：使用EP、USP的原檢測(cè)方法，需要進(jìn)行方法確認(rèn)，確認(rèn)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室可滿足靈敏度、線性、準(zhǔn)確度等的需求，以確保檢測(cè)結(jié)果的可靠性。

7 什么情況下需要做加強(qiáng)AMES試驗(yàn)？

肜祺：若不能在權(quán)威機(jī)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索到已識(shí)別出的n-亞硝胺雜質(zhì)的毒理數(shù)據(jù)，可用加強(qiáng)AMES試驗(yàn)、體內(nèi)致突變?cè)囼?yàn)等確證該n-亞硝胺雜質(zhì)的活性；尤其是在樣品中該亞硝胺雜質(zhì)檢出量超出根據(jù)常規(guī)方式（如致癌效力）計(jì)算出的限度時(shí)可以進(jìn)行。
但是對(duì)于亞硝胺雜質(zhì)檢出量超出根據(jù)常規(guī)方式計(jì)算出的限度時(shí)，首先需要確認(rèn)其來(lái)源，盡量從源頭進(jìn)行去除，采取避免為主，控制為輔的控制策略。

無(wú)論您是制藥行業(yè)的資深專家，還是對(duì)前沿醫(yī)學(xué)技術(shù)充滿好奇的新晉學(xué)習(xí)者，美迪西云講堂都將為您敞開(kāi)一扇通往藥物研發(fā)未來(lái)的大門。如果您有想要了解的熱門主題或者對(duì)臨床前研究的服務(wù)感興趣想在云講堂聽(tīng)到詳細(xì)的介紹，歡迎留言或者提問(wèn)。

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