iTRAQ技術(shù)原理： 

iTRAQ試劑為可與氨基酸N端及賴氨酸側(cè)鏈連接的胺標(biāo)記同重元素(isobaric)。在質(zhì)譜圖中，任何一種iTRAQ試劑標(biāo)記的不同樣本中的同一蛋白質(zhì)表現(xiàn)為相同的質(zhì)荷比。
在串聯(lián)質(zhì)譜中，信號(hào)離子表現(xiàn)為不同質(zhì)荷比(114～117)的峰，因此，根據(jù)波峰的高度及面積，可以得到蛋白質(zhì)的定量信息。 

iTRAQ試劑結(jié)構(gòu)：

iTRAQ試劑是一種小分子同重元素化學(xué)物質(zhì)，包括三部分：

一端是報(bào)告部分 reporter group；
另一端是肽反應(yīng)部分 peptide reactive group；
中間部分是平衡部分 balance group。

其中： reporter group：質(zhì)量為114Da、115 Da、116 Da、117 Da，因此iTRAQ試劑共四種。
? peptide reactive group：將reporter group與肽N端及賴氨酸側(cè)鏈連接，幾乎可以標(biāo)記樣本中所有蛋白質(zhì)。
? balance group：質(zhì)量為31 Da、30 Da、29 Da、28 Da，使得四種iTRAQ試劑分子量均為145 Da，保證iTRAQ標(biāo)記的同一肽段m/z相同。
圖1 iTRAQ 試劑結(jié)構(gòu)
 
綜上：
    4個(gè)來源不同的相同蛋白樣品在一級(jí)質(zhì)譜上表現(xiàn)相同；
    Balance group在二級(jí)質(zhì)譜發(fā)生中性丟失；
    Reporter group 在二級(jí)質(zhì)譜產(chǎn)生４個(gè)報(bào)告離子，分別是114、115、116和117；

操作流程：

iTRAQ技術(shù)主要特點(diǎn)：

1.分離能力強(qiáng)、分析范圍廣
2.定性分析結(jié)果可靠，可以同時(shí)給出每一個(gè)組分的分子量和豐富的結(jié)構(gòu)信息
3.MS具備高靈敏度、檢測限低
4.分析時(shí)間快，分離效果好
5.自動(dòng)化程度高
6.iTRAQ技術(shù)不僅可發(fā)現(xiàn)胞漿蛋白，還有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白7.iTRAQ技術(shù)可檢測出低豐度蛋白、強(qiáng)堿性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白