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2022年的10月29日是第十七個(gè)“世界卒中日”， “世界卒中日”是由世界卒中組織（World Stroke Organization）呼吁設(shè)立的，是為了呼吁在全球范圍內(nèi)加強(qiáng)公眾對(duì)腦卒中的認(rèn)識(shí)。
腦卒中（stroke）是腦中風(fēng)學(xué)名，泛指由于高脂血癥、血液黏稠、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓等所導(dǎo)致的心臟、大腦以及全省組織發(fā)生的缺血性或出血性疾病，是一種突然起病的腦血液循環(huán)障礙性疾病。臨床表現(xiàn)以猝然昏撲、不省人事或突然發(fā)生口眼歪斜、半身不遂、智力障礙為主要特征。腦中風(fēng)主要有缺血性中風(fēng)（短暫性腦缺血發(fā)作、動(dòng)脈粥樣硬化性血栓 性腦梗塞、腔隙性腦梗塞、腦栓塞）、出血性中風(fēng)（腦出血、蛛網(wǎng)膜下腔出血）兩大類。 腦卒中因其高患病率、高發(fā)病率、高死亡率和高致殘率的特點(diǎn)被稱為“人類健康的頭號(hào)殺手”， 在我國(guó)，心腦血管每年治療費(fèi)用支出5406億元，腦血管疾病每年治療費(fèi)用占心腦血管疾病25.68%，其中，缺血性腦卒中占比18%，出血性腦卒中占比7%。
盡管腦卒中的每年治療費(fèi)用支出如此之高，但依然存在臨床特異性治療的藥物少的問(wèn)題，臨床用藥需求方面存在巨大缺口，因此腦卒中藥物的市場(chǎng)潛力大，開(kāi)發(fā)前景好。
對(duì)于腦卒中藥物的臨床前開(kāi)發(fā)繞不開(kāi)藥代與藥效試驗(yàn)這兩座大山，而藥代與藥效試驗(yàn)都會(huì)用到的模型便格外重要。
1、動(dòng)物模型：
局灶性腦缺血：MCAO/R模型-線栓法、栓塞法、光化學(xué)法等
全腦缺血：血管夾閉法
2、體外模型：
氧糖剝奪模型
雙氧水等刺激的氧化應(yīng)激模型
其他：transwell法考察BBB指標(biāo)、離體腦切片、神經(jīng)血管單元等
由于大腦中動(dòng)脈栓塞模型MCAO（Middle Cerebral Artery Occlusion）的發(fā)病機(jī)理與人類缺血性腦卒中表現(xiàn)相似，對(duì)于制作模擬人腦缺血模型對(duì)腦缺血發(fā)病機(jī)制及藥物篩選有重要意義，是美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院（National Institutes of Health，NIH）和卒中治療學(xué)術(shù)產(chǎn)業(yè)圓桌會(huì)議（Stroke Treatment Academic Industry Roundtable，STAIR）重點(diǎn)推薦藥效學(xué)評(píng)價(jià)體系。
在試驗(yàn)中通常使用經(jīng)典的線栓法建立模型：分離暴露頸部血管，從頸外動(dòng)脈( external carotid artery，ECA)或頸總動(dòng)脈( common carotid artery，CCA)分叉處插入尼龍線，進(jìn)入頸內(nèi)動(dòng)脈( internal carotid artery，ICA)，阻斷大腦中動(dòng)脈（Middle Cerebral Artery，MCA）起始端及其所有側(cè)支血液供應(yīng)，導(dǎo)致MCA區(qū)局灶缺血。
模型評(píng)估是檢驗(yàn)結(jié)果的關(guān)鍵步驟。美迪西嚴(yán)格遵循STAIR腦卒中臨床前藥物開(kāi)發(fā)策略指導(dǎo)，擁有豐富的MCAO模型建立經(jīng)驗(yàn)和成熟的MCAO模型系統(tǒng)評(píng)價(jià)體系：
? 病灶穩(wěn)定，高成功率，高存活率的大鼠、小鼠MCAO模型；
? 可靠有效的量效時(shí)效關(guān)系評(píng)價(jià)；
? 可完成短暫性腦缺血和永久性腦缺血的藥效評(píng)價(jià)；
? 可根據(jù)STAIR技術(shù)指南要求，完成多種藥效學(xué)核心指標(biāo)考察；
? 可根據(jù)客戶定制要求，對(duì)特殊疾病嚙齒類動(dòng)物進(jìn)行造模并完成活性評(píng)價(jià)。
動(dòng)物：ICR小鼠，雄性
組別：對(duì)照組，模型組，陽(yáng)性藥組（先必新 ）
方法：
線栓法對(duì)小鼠右側(cè)中動(dòng)脈進(jìn)行阻斷，阻斷1h后拔除線栓，實(shí)現(xiàn)再灌注。
量效考察：動(dòng)物分別在梗死后0.5h靜脈注射給藥陽(yáng)性藥先必新20，10，1，0.1和0.01mg/kg，考察量效關(guān)系。
時(shí)效考察：動(dòng)物分別在梗死后0.5h以及再灌注后2h，6h，8h和10h靜脈注射給予陽(yáng)性藥先必新20mg/kg，考察時(shí)效關(guān)系。
考察指標(biāo)：TTC考察梗死體積，烘干法考察腦含水量
TCC染色法是對(duì)缺血腦組織進(jìn)行染色觀察的常見(jiàn)手段，具體操作為迅速將大鼠大腦取出，用冷鹽水沖洗后，快速放于-20℃冰箱中放置10分鐘，待腦組織稍硬后，取出切掉嗅球、垂體、低位腦干，由前向后冠狀切片，均勻切成2 mm厚腦片，等分切成5片，置于1%TTC溶液中，37℃避光孵育30分鐘，每隔5分鐘左右翻動(dòng)一次。TTC可與正常組織內(nèi)的脫氫酶系統(tǒng)反應(yīng)被還原為玫瑰紅色，因此使組正常組織染呈玫瑰紅色，梗死組織呈白色。
量效關(guān)系考察（TTC和腦含水量） （mean±SEM）
時(shí)效關(guān)系考察（TTC和腦含水量） （mean±SEM）
動(dòng)物：ICR小鼠，雄性
組別：對(duì)照組，模型組，陽(yáng)性藥組（先必新 ）
方法：
線栓法對(duì)小鼠右側(cè)中動(dòng)脈進(jìn)行阻斷，阻斷1h，2h和4h后拔除線栓，實(shí)現(xiàn)再灌注。
治療時(shí)間窗考察：動(dòng)物分別在梗死后0.5h靜脈注射給藥陽(yáng)性藥先必新20mg/kg，考察治療時(shí)間窗。
考察指標(biāo)：TTC法考察梗死體積，排水法考察腦體積，烘干法考察腦含水量
治療時(shí)間窗考察 A：TTC；B：腦體積，C：腦含水量 （mean±SEM）
動(dòng)物：ICR小鼠，雄性
組別：對(duì)照組，模型組，陽(yáng)性藥組（先必新 ）
方法：
線栓法對(duì)小鼠右側(cè)中動(dòng)脈進(jìn)行阻斷，阻斷1h后拔除線栓，實(shí)現(xiàn)再灌注。
神經(jīng)功能恢復(fù)考察：動(dòng)物分別在梗死后0.5h靜脈注射給藥陽(yáng)性藥先必新20mg/kg，考察治療時(shí)間窗。
考察指標(biāo)：Zea-longa評(píng)分，平衡木通過(guò)時(shí)間，轉(zhuǎn)棒滯留時(shí)間，抓握力
神經(jīng)功能藥效學(xué)考察：A: Zea-longa評(píng)分；B: 平衡木通過(guò)時(shí)間；C: 轉(zhuǎn)棒滯留時(shí)間；D: 抓握力（mean±SEM）
動(dòng)物：SD大鼠，雄性
組別：對(duì)照組，模型組，陽(yáng)性藥1組（依達(dá)拉奉 ），陽(yáng)性藥2組（尼莫地平）
方法：
線栓法阻斷大鼠右側(cè)中動(dòng)脈，阻斷2h后再灌注。
藥效學(xué)考察：動(dòng)物分別在梗死后0.5h靜脈注射給藥陽(yáng)性藥，考察兩陽(yáng)性藥藥效學(xué)作用。
考察指標(biāo)：Zea-longa評(píng)分， TTC法考察梗死體積
TCC染色法是對(duì)缺血腦組織進(jìn)行染色觀察的常見(jiàn)手段，具體操作為迅速將大鼠大腦取出，用冷鹽水沖洗后，快速放于-20℃冰箱中放置10分鐘，待腦組織稍硬后，取出切掉嗅球、垂體、低位腦干，由前向后冠狀切片，均勻切成2 mm厚腦片，等分切成5片，置于1%TTC溶液中，37℃避光孵育30分鐘，每隔5分鐘左右翻動(dòng)一次。TTC可與正常組織內(nèi)的脫氫酶系統(tǒng)反應(yīng)被還原為玫瑰紅色，因此使組正常組織染呈玫瑰紅色，梗死組織呈白色。
大鼠的行為學(xué)考察可以抓起大鼠的尾巴，使大鼠離臺(tái)面10cm高。如果大鼠的前爪處于伸直狀態(tài)，則說(shuō)明大鼠行為學(xué)正常；若尾巴提起后，癱瘓側(cè)前肢回收并屈于腹下，行走時(shí)向癱瘓側(cè)旋轉(zhuǎn)，則說(shuō)明大鼠MCAO大鼠模型成功。
另外還有Longa評(píng)分法，分值越高，說(shuō)明動(dòng)物行為障礙越嚴(yán)重。模型大鼠成功構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)：大鼠出現(xiàn)癥狀如偏癱，對(duì)側(cè)前肢下垂和站立不穩(wěn)。
① 無(wú)神經(jīng)功能缺陷：0分；
② 癱瘓側(cè)前爪不能完全伸展：1分；
③ 行走時(shí)向癱瘓側(cè)轉(zhuǎn)圈：2分；
④ 行走時(shí)向癱瘓側(cè)傾倒：3分；
⑤ 不能自動(dòng)行走，存在意識(shí)喪失現(xiàn)象：4分。
大鼠行為學(xué)評(píng)分
近年來(lái)，隨著生物醫(yī)藥技術(shù)的不斷發(fā)展，越來(lái)越多的腦卒中藥物從靶點(diǎn)走到了臨床前試驗(yàn)的階段，有了動(dòng)物藥效模型評(píng)價(jià)的助力，相信未來(lái)臨床上腦卒中治療問(wèn)題將被攻克！
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