隨著生物技術和基因工程領域的不斷發(fā)展，小核酸藥物的研發(fā)熱度持續(xù)增加。許多制藥公司、科研機構和學術界都在積極投入進行小核酸藥物的研究和開發(fā)。小核酸藥物相較于傳統(tǒng)藥物，具有許多優(yōu)勢：能夠實現(xiàn)高度的靶向性，研發(fā)周期相對較短，可以用于治療各種疾病，如癌癥、遺傳性疾病、病毒感染等，具有廣泛的應用前景。目前，全球已有19款小核酸藥物獲批上市。

小核酸藥物開發(fā)過程中的質量學研究是非常重要的一環(huán)，質量學研究主要涉及到以下幾個方面：合成工藝，穩(wěn)定性研究，制劑開發(fā)，雜質檢測和控制、藥代動力學、毒性學方面的研究。需要確保在整個研發(fā)過程中保持一致的質量標準，以確保最終研發(fā)的藥物產品符合相關的質量標準和法規(guī)要求。

近期，美迪西云講堂特邀工藝分析部主任杜建博士為大家解讀小核酸藥物質量研究的相關指導原則，介紹小核酸藥物質量標準的制定，以及方法開發(fā)和驗證，并將通過美迪西【核酸藥物研發(fā)服務平臺】的豐富案例，解析小核酸藥物質量研究的注意事項。本文為大家整理了直播中的高頻提問，希望能夠幫助或減少研發(fā)中的苦惱和困惑。

歡迎觀看文章下方“視頻回放”，回顧杜建博士的整場分享。

問：核酸單體的方法開發(fā)有何特別之處？

答：核酸單體和小分子在某些方面有相似之處，比如在檢測項目和標準制定方面可以參考小分子的相關經(jīng)驗。然而，核酸單體中存在著一些特殊雜質，需要在方法開發(fā)時盡可能地分離這些未知的雜質。此外，對核酸單體純度的要求更高，以避免任何未知或已知雜質通過合成過程帶入最終的核酸API中。因此，在質量標準的制定方面也會有一些不同之處。核酸藥物開發(fā)中這些細微之處需要特別關注，以確保最終產品的質量和安全性。

問：為什么用MDBA后色譜柱柱效會變差？

答：色譜柱在色譜分析中起著重要作用，但它與其他參數(shù)如流速和梯度等相互影響，是一個綜合效果。在優(yōu)化過程當中，僅僅調整色譜柱對于良好的峰形和分離度并不能得到兼顧，只有在適當調整流速和離子堆濃度后，才能實現(xiàn)峰形和分離度的綜合提高。因此優(yōu)化色譜分析過程需要綜合考慮各種參數(shù)的調整，才能達到最佳的分析效果。

問：在純度方法，硫代后峰形已存異常問題的峰形有沒有一定要求修好？

答：如果能夠修好的話肯定是最好，因為它本身就是已知的雜質的話，最好峰形能夠達到比較好的期限分離，那是最理想的情況。其次的話，如果說已經(jīng)做了一系列的優(yōu)化，包括流速、梯度和更換色譜柱等操作仍無法解決問題，那么不一定非要追求完美的峰形。不一定非要按照小分子的思路，必須讓峰形做得很完美。只要不特別影響低濃度分析，也是可以接受的。這個問題確實需要根據(jù)具體情況進行綜合考慮，需要根據(jù)不同項目的特點、譜圖以及實際情況進行平衡取舍。

問：單鏈有關物質方法開發(fā)專屬性，主峰如何確認未包含有雜質，請問是和跟小分子一樣看紫外光譜純度嗎？

答：在確定正義鏈或反義鏈中的n+1、n-1或其他雜質是否包含在主峰內時，通常無法通過紫外（UV）檢測來確認，因為它們的紫外響應相似。更有效的方法是通過質譜（MS）分析和鑒別，觀察其質譜圖，并通過優(yōu)化分析方法嘗試將n-1或n+1的雜質從主峰中分離出來。

另一種方法是請工藝同事合成一些n+1、n-1或其他類型的雜質，如營養(yǎng)雜質、硫代雜質等，以便更直觀地開發(fā)分析方法，并確定主峰內是否包含這些雜質。如果工藝無法合成這些雜質，可以考慮獲取這些雜質的對照品，從分析的角度來說，這是最佳方法用于方法開發(fā)和確認。

問：定量限低于報告限和鑒定限可以接受嗎？

答：正常情況下，定量限肯定要高于鑒定限和報告限，不可能是報告限比定量限還高，或者鑒定限比定量限高的情況。舉例來說，對于核酸藥物而言，鑒定限為1.0，定量限為1.5。不能將未知雜質的鑒定限設定在1.5，然后將其定量限設定在1.6，這違反了正常邏輯。正常情況下，定量限應該高于鑒定限。

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