基因毒性雜質(zhì)是指可能對生物體細胞的遺傳物質(zhì)（DNA或RNA）造成損害的化合物或物質(zhì)。這些雜質(zhì)可能導(dǎo)致基因突變、染色體畸變、DNA斷裂等不良影響，進而影響細胞的正常功能和生長，甚至引發(fā)癌癥等疾病。近年對基因毒性雜質(zhì)的重視持續(xù)提升，引發(fā)了更多關(guān)于基因毒性雜質(zhì)的研究和探討。在新藥研發(fā)的過程中，基因毒性雜質(zhì)是我們不得不面對一個重要的問題。對其進行充分的研究和評估至關(guān)重要，可以保障患者安全，提高藥物品質(zhì)，符合監(jiān)管要求，是新藥研發(fā)中的關(guān)鍵步驟之一。

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01 可以用mini-Ames 試驗代替Ames試驗嗎？

畢增：按照我們的經(jīng)驗，在IND申報階段，雜質(zhì)使用mini-Ames試驗可作為正式Ames試驗的替代材料進行申報。然而，在新藥上市申報和仿制藥上市申報時應(yīng)該采用標(biāo)準(zhǔn)Ames試驗，要注意M7（R2）的注釋2所說的微量化測試并不是指mini-Ames試驗，是指待測化合物數(shù)量有限不能使用符合指導(dǎo)原則的試驗濃度時可以采取的措施。

02 仿制藥研發(fā)，每個雜質(zhì)都需要進行軟件評估嗎？

畢增：是的，M7（R2）問答中明確建議對所有雜質(zhì)進行模擬和評估。通過我直播中分享的案例，可以看到一些化合物，即使沒有基因毒性警示結(jié)構(gòu)，也可能具有基因毒性。因此，即使某些化合物不在我們的警示結(jié)構(gòu)列表中，仍需對其進行評估，因為它其實也是可能有基因毒性的。

03 如果有Ames試驗數(shù)據(jù)，還需要進行軟件評估嗎？

畢增：需要根據(jù)情況而定。如果數(shù)據(jù)庫收錄的Ames試驗是不是符合OECD指導(dǎo)原則或ICH S2的標(biāo)準(zhǔn)Ames試驗，即是否使用了5種菌株，并且在有代謝激活和沒有代謝激活兩種途徑下都進行了實驗，并且試驗應(yīng)該是符合GLP規(guī)范的，在滿足以上前提的情況下，Ames試驗Negative，那么就無需進行軟件評估，但是需要進行比較全面的數(shù)據(jù)庫檢索。

04 是在藥品研發(fā)的哪個階段評估呢？

畢增：根據(jù)我的理解，需要根據(jù)每個項目的具體情況進行分析。我的建議是，在工藝穩(wěn)定后，例如工藝路線已經(jīng)確定并且優(yōu)化工作已經(jīng)完成后，在小試生產(chǎn)階段同步開展評估。在這個階段，通常不會對之前的工藝進行大幅調(diào)整，除非在后續(xù)放大過程中發(fā)現(xiàn)了一些問題，例如放大效應(yīng)導(dǎo)致雜質(zhì)超標(biāo)或者收率較大幅度的。一般情況下，建議在小試驗階段進行相應(yīng)的評估。這樣可以提前進行方法開發(fā)和簡單確認工作，并且隨著逐步放大的過程，積累數(shù)據(jù)，為后續(xù)的雜質(zhì)控制策略提供數(shù)據(jù)支持。

05 Case ultra 預(yù)測合規(guī)嗎？CDE老師認可代替AMES實驗嗎？

畢增：這個是合規(guī)的，可以放心。因為我們完成的多個仿制藥項目，包括新藥的IND申報，還是客戶委托完成的發(fā)補的雜質(zhì)預(yù)測，都有使用 Case ultra進行預(yù)測，都是沒有問題的。

Case ultra有Statistical Model（GT1_BMUT）統(tǒng)計學(xué)模型，該模型是通過RCA協(xié)議與美國FDA合作開發(fā)和驗證的模型，訓(xùn)練集中包含13760個化合物；同時有Expert Rule Model（GT_EXPERT）專家規(guī)則模型，參考數(shù)據(jù)集中有17309個化合物作為參考數(shù)據(jù)集用于驗證規(guī)則。警示結(jié)構(gòu)的數(shù)量有240個，包含普通的陽性警示結(jié)構(gòu)，陽性減弱和陽性增強的子類型以及全局的陽性減弱的警示結(jié)構(gòu)。

Case ultra可以滿足ICH M7同時使用兩種模型對化合物進行預(yù)測的要求，并且所有的模型都是進行過嚴格驗證的，可以查看后臺數(shù)據(jù)，可以查看警示結(jié)構(gòu)和相關(guān)細節(jié)，擁有明確的算法和良好的預(yù)測透明度，符合OECD的相關(guān)規(guī)則。

06 三氟甲磺酸那個案例中樣品本身就有三氟甲磺酸，這個水解方式還能行嗎？

畢增：這個案例是由于在方法開發(fā)初期，我們對API進行了三氟甲磺酸的檢測，并未檢出該雜質(zhì)?；谶@個結(jié)果，我采用這種檢測方法，如果樣品中本身就有三氟甲磺酸檢出，則會導(dǎo)致雜質(zhì)被高估，這種情況下可以檢測水解后生成的另一個片段，比如說在案例中的3-羥基-2-硝基吡啶。

07 雜質(zhì)的軟件評估都可以使用哪些軟件？

畢增：除了Case Ultra之外，Derek和Sarah也是同樣優(yōu)秀的商業(yè)預(yù)測軟件。當(dāng)然，除了商業(yè)軟件外，也有一些免費的軟件，比如VEGA GUI，我個人使用過該軟件，預(yù)測的結(jié)果并不明確?？赡苁且驗檐浖采w的的數(shù)據(jù)庫相對較小，覆蓋的化合物種類也有限，導(dǎo)致用于訓(xùn)練軟件算法的化合物數(shù)量較少，從而影響了計算結(jié)果的可靠性，合規(guī)性方面有較大的挑戰(zhàn)，大家使用這類軟件的時候還是要慎重一些。

08 臨床上單次使用的局部給藥制劑中有一個雜質(zhì)超過了界定限度，要做哪些安全性評價？

畢增：對于制劑中超過界定限度的雜質(zhì)，建議按照ICH Q3B（R2）的附件3-降解產(chǎn)物鑒定和界定決策樹進行研究，首先要確定該雜質(zhì)是否能降低至小于等于界定限，如果不能的話則考慮根據(jù)患者人群、用藥時間進行以下研究：致突變性研究（點突變、染色體畸變）、一般毒性研究（單個種類，通常14至90天）或者酌情考慮是否開展其他的毒性終點試驗。

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