由于腫瘤機(jī)制的多樣性和復(fù)雜性，聯(lián)合治療已經(jīng)成為腫瘤治療研究的趨勢(shì)和共識(shí)。本文將溶瘤病毒與CAR-T免疫療法結(jié)合，所產(chǎn)生的驚人效果令人振奮。美迪西緊跟國(guó)際免疫腫瘤藥物研發(fā)趨勢(shì)，推進(jìn)國(guó)內(nèi)外客戶新藥研發(fā)進(jìn)程，拓寬其在創(chuàng)新藥物熱點(diǎn)領(lǐng)域的發(fā)展布局。公司在腫瘤模型方面，尤其是免疫腫瘤動(dòng)物模型評(píng)價(jià)系統(tǒng)領(lǐng)域，引進(jìn)國(guó)際先進(jìn)的PET-CT影像系統(tǒng)、放療輻射系統(tǒng)、IVIS小動(dòng)物成像系統(tǒng)，多通道流式細(xì)胞分析儀等精密儀器設(shè)備，開發(fā)藥物研發(fā)關(guān)鍵技術(shù)，系統(tǒng)性地建立了超過250種腫瘤模型。公司長(zhǎng)期為國(guó)際大型抗腫瘤藥物公司武田制藥等客戶提供抗腫瘤藥物研究服務(wù)。

    作為兩種目前極為熱門的腫瘤免疫手段，溶瘤病毒和CAR-T療法（嵌合抗原受體T細(xì)胞免疫療法）近年來被很多公司和科研中心所青睞，研究進(jìn)展也不斷更新。然而在發(fā)展中的CAR-T療法由于無法限制性的轉(zhuǎn)移識(shí)別腫瘤抗原，并且很難克服腫瘤微環(huán)境對(duì)CAR-T細(xì)胞的影響，因此關(guān)于CAR-T的研究在安全性上有所顧慮，并且無法將治療的領(lǐng)域延伸至實(shí)體瘤。

    該研究的作者之一Saul Priceman教授說，“第一，實(shí)體瘤上，適合T細(xì)胞用CAR重定向的靶標(biāo)有限。第二，實(shí)體瘤被所謂的免疫抑制性腫瘤微環(huán)境包圍，當(dāng)一種CAR-T細(xì)胞試圖進(jìn)入腫瘤，存活下來并殺死癌細(xì)胞時(shí)，會(huì)因?yàn)檫@種屏障而無法有效發(fā)揮作用。溶瘤病毒能夠突破這一屏障。”

    反觀溶瘤病毒，因其可以特異性的靶向腫瘤，具備良好的免疫原性和攜帶外源基因定向轉(zhuǎn)入腫瘤的能力，已成為針對(duì)實(shí)體腫瘤的有前景的治療手段。作為首個(gè)批準(zhǔn)臨床使用的溶瘤病毒類藥物T-VEC，研究發(fā)現(xiàn)它可以將可溶性的腫瘤抗原暴露并且引導(dǎo)宿主的抗腫瘤免疫反應(yīng)。

    文章的研究正是利用了這一點(diǎn)，將溶瘤病毒作為CAR-T細(xì)胞進(jìn)軍實(shí)體瘤的”司機(jī)"。他們通過基因工程改造了一種溶瘤病毒，使其進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，迫使細(xì)胞在表面表達(dá)截短的CD19（CD19t）。文中的實(shí)驗(yàn)顯示，這種溶瘤病毒（被稱為OV19t）能在三陰性乳腺癌細(xì)胞系以及胰腺癌、前列腺癌、卵巢癌和頭頸癌、腦腫瘤細(xì)胞中起效。

    01 溶瘤病毒成功將CD19t遞送給實(shí)體瘤細(xì)胞（體外）

    研究人員使用嵌合PSE啟動(dòng)子和CD19t的骨肉瘤溶瘤病毒去大范圍感染不同種類的實(shí)體瘤。為了能夠更直觀的表達(dá)溶瘤病毒轉(zhuǎn)染癌細(xì)胞的能力和癌細(xì)胞表面CD19t的表達(dá)，研究人員對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行了染色。用溶瘤病毒感染癌細(xì)胞后，癌細(xì)胞在其表面表達(dá)了豐富的CD19。進(jìn)一步，研究人員利用流式細(xì)胞術(shù)量化測(cè)量了不同時(shí)間段里腫瘤細(xì)胞表面CD19t的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)在轉(zhuǎn)染72小時(shí)后，仍有70%的腫瘤細(xì)胞可以檢測(cè)到CD19t的表達(dá)，這就給CAR-T細(xì)胞的特異性識(shí)別和靶向提供了充足的時(shí)間。

    之后，研究人員在來自多種實(shí)體瘤（包括胰腺癌、前列腺癌和卵巢癌）的細(xì)胞中測(cè)試了「OV19t+CD19-CAR-T」聯(lián)合療法。

    02 實(shí)體瘤表達(dá)的CD19t能夠重新引導(dǎo)CD19-CAR-T細(xì)胞的活動(dòng)和細(xì)胞毒性（體外）

    在這一步的驗(yàn)證中，研究人員將感染了OV19t的腫瘤細(xì)胞和CD19-CAR T細(xì)胞共孵育，并用T細(xì)胞表面CD25和4-1BB的表達(dá)來指征T細(xì)胞的激活。結(jié)果表明，溶瘤病毒能夠多次為T細(xì)胞呈遞抗原，并且介導(dǎo)CAR T細(xì)胞對(duì)腫瘤的免疫反應(yīng)。

    03 非臨床研究中動(dòng)物模型的抑癌效力測(cè)試（體內(nèi)）

    接著，研究人員繼續(xù)在小鼠腫瘤模型中嘗試這種策略。他們發(fā)現(xiàn)，將OV19t與CAR-T細(xì)胞聯(lián)合產(chǎn)生了強(qiáng)大的協(xié)同效應(yīng)，治愈了超過一半的小鼠，~60%的小鼠完全緩解，而僅22%單獨(dú)接受OV19t治療的小鼠腫瘤完全消退。

    研究者們還發(fā)現(xiàn)，在接受聯(lián)合治療的小鼠中，OV19t會(huì)持續(xù)向癌細(xì)胞擴(kuò)散，被殺死的腫瘤細(xì)胞會(huì)釋放額外的病毒拷貝，使鄰近的腫瘤細(xì)胞表達(dá)CD19，導(dǎo)致了顯著更強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞殺傷活性。更重要的是，當(dāng)用癌細(xì)胞再次挑戰(zhàn)被治愈的小鼠時(shí)，未有新的腫瘤形成，表明這種病毒-CAR-T聯(lián)合方案幫助建立了腫瘤特異性免疫記憶，可阻止癌癥復(fù)發(fā)。

    04 CD19-CAR T療法接到的腫瘤殺傷可以釋放溶瘤病毒OV19t

    為了考察這種方法是否可以克服溶瘤病毒對(duì)實(shí)體瘤的次優(yōu)或不均勻感染，實(shí)驗(yàn)人員測(cè)試了殺傷后的腫瘤細(xì)胞是否可以在實(shí)體瘤的環(huán)境中釋放溶瘤病毒片段。結(jié)果顯示，CD19-CAR-T細(xì)胞介導(dǎo)的腫瘤殺傷促進(jìn)了病毒顆粒的釋放以及持續(xù)的腫瘤細(xì)胞感染。除了表達(dá)CD19t，研究還證實(shí)，引入病毒逆轉(zhuǎn)了腫瘤惡劣的微環(huán)境，使其更容易接受CAR-T細(xì)胞治療。

    這一發(fā)現(xiàn)為實(shí)體瘤的治療方案提供了新的思路和希望，整合CAR-T療法和溶瘤病毒帶來更好的療效。美迪西也將持續(xù)關(guān)注腫瘤免疫療法的新進(jìn)展和新思路，并利用不斷完善的腫瘤免疫療法評(píng)價(jià)平臺(tái)，助力研發(fā)。