銀屑病是以表皮角質(zhì)形成細(xì)胞過度增殖和分化不全、真皮淺層微血管擴(kuò)張并伴有炎癥反應(yīng)為病理特征的表皮角化性皮膚病，其發(fā)病機(jī)制迄今尚未完全清楚。綜合近年來的研究報道，關(guān)于銀屑病發(fā)病的新概念認(rèn)為：銀屑病是多基因遺傳背景下T細(xì)胞失常的免疫性疾病，表皮過度增殖與分化異常和炎癥等疾病現(xiàn)象涉及到細(xì)胞和分子水平的異常調(diào)控，后者是指在銀屑病中異常表達(dá)的免疫分子、細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)和調(diào)節(jié)分子。國外文獻(xiàn)報導(dǎo)ET-1(內(nèi)皮素1)、sE-selectin（可溶性選擇素E）、sIL-2R（可溶性白介素2受體）、IL-6（白介素6）、IL-8（白介素8）、CD4+/CD8+等與銀屑病有關(guān)。

下面簡要介紹一下幾種與銀屑病有關(guān)的體內(nèi)外藥效學(xué)試驗(yàn)?zāi)Ｐ图敖Y(jié)果評價：

一、體內(nèi)試驗(yàn)

表皮細(xì)胞增殖過快和角化不全是銀屑病的基本病理特點(diǎn)，小鼠尾部鱗片的表皮缺乏顆粒層的形成，雌激素周期的小鼠陰道上皮細(xì)胞增殖活躍，上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)換加快，均與人銀屑病表皮病理特征相似。藥物如能抑制小鼠陰道上皮有絲分裂和促進(jìn)鼠尾顆粒層形成，就可能具有抗銀屑病作用。下面兩種方法是被廣泛使用的較為經(jīng)典的銀屑病藥效學(xué)模型：

1、對小鼠陰道上皮細(xì)胞有絲分裂的影響試驗(yàn)

雌性小鼠預(yù)先注射雌激素（如乙烯雌酚）數(shù)日，使其處于雌激素生理周期。陰道給予藥物數(shù)日，末次給藥后腹腔注射秋水仙堿以終止細(xì)胞分裂。取小鼠陰道組織，固定，染色，觀察陰道上皮細(xì)胞的有絲分裂指數(shù)。常以甲氨蝶呤為陽性對照。
若試驗(yàn)結(jié)果表明藥物有抑制陰道上皮細(xì)胞的有絲分裂的作用，則可提示對銀屑病的療效。

2、對小鼠尾鱗片表皮細(xì)胞生成的影響試驗(yàn)

取小鼠，將試驗(yàn)藥物直接在尾部外涂給藥一定時段(一般為2周)，取尾根部皮膚，固定，染色，測量鼠尾表皮厚度和顆粒形成情況。
 若試驗(yàn)結(jié)果表明藥物有促進(jìn)鼠尾顆粒層形成作用，則可提示對銀屑病的療效。
 

3、對鹽酸普奈洛爾所致豚鼠耳部皮膚銀屑樣皮損的影響

采用鹽酸普奈洛爾乳劑型搽劑（5％）連續(xù)涂抹豚鼠兩側(cè)耳廓皮膚，每日2次，連續(xù)2周后取少量豚鼠的兩側(cè)耳廓皮膚，固定，染色，光鏡觀察評價造模質(zhì)量。于耳廓皮膚涂抹給藥，每日2次，連續(xù)2周。同法觀察耳部皮膚的角化層、顆粒層、棘細(xì)胞層、基底細(xì)胞層及固有層的變化情況，并測定表皮厚度。
若試驗(yàn)結(jié)果表明藥物有對抗模型組所致的角化層角化不完全或過度、棘細(xì)胞層變厚、表皮厚度增加等狀況則可提示對銀屑病的療效。
該試驗(yàn)也是一種考察銀屑病藥效作用的有效的動物模型。

4、對小鼠血清可溶性選擇素（sE-selectin）和血漿內(nèi)皮素（ET-1）水平的影響。

小鼠連續(xù)給藥2周后，采用合適的方法測定血清可溶性選擇素（sE-selectin）和血漿內(nèi)皮素（ET-1）的水平。
若試驗(yàn)結(jié)果表明藥物具有降低血清可溶性選擇素（sE-selectin）和血漿內(nèi)皮素（ET-1）的水平等作用則可提示對銀屑病的療效。
有文獻(xiàn)報道血清可溶性選擇素的水平與支氣管哮喘、過敏性紫癜、慢性乙肝等臨床癥狀有一定的相關(guān)性，血漿內(nèi)皮素水平也是多種病癥的相關(guān)性指標(biāo)，但二者與銀屑病的相關(guān)性尚不十分清楚。目前國內(nèi)無這方面的報道，國外對此種模型也尚處于初期研究階段。

二、體外試驗(yàn)

1、對角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的影響（MTT法）

采用MTT法考察藥物對于各種角質(zhì)形成細(xì)胞的生長的影響，采用的細(xì)胞有人永生化表皮細(xì)胞(HaCaT細(xì)胞)、角質(zhì)形成細(xì)胞（Colo-16）等。 
角質(zhì)形成細(xì)胞的過度增殖是銀屑病主要的發(fā)病因素之一，若試驗(yàn)結(jié)果表明藥物具有抑制角質(zhì)形成細(xì)胞增殖作用則可提示對銀屑病的療效。

2、對血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖抑制作用（MTT法）

采用MTT法考察藥物對于血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖的影響。
真皮淺層微血管擴(kuò)張也是銀屑病的特征性病理變化之一, 有研究認(rèn)為銀屑病血管變化先于表皮增生,而銀屑病血管生成增加的核心是血管內(nèi)皮細(xì)胞的增生。
若試驗(yàn)結(jié)果表明藥物具有抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖作用則可提示對銀屑病的療效。

3、對角質(zhì)形成細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞周期的影響

采用流式細(xì)胞儀檢測方法對藥物處理過的角質(zhì)形成細(xì)胞（如HaCaT細(xì)胞）和血管內(nèi)皮細(xì)胞（如ECV304細(xì)胞）周期進(jìn)行分析。對細(xì)胞增殖能力的有抑制作用藥物，其可能的用機(jī)制是阻止或延緩角質(zhì)細(xì)胞從G1期到S期的過渡，或阻止于S期等抑制細(xì)胞周期的方式，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡來發(fā)揮作用。

4、對角質(zhì)形成細(xì)胞Cyclins/CDKs的影響

采用分子生物學(xué)的方法考察藥物對角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCaT細(xì)胞）CyclinE(細(xì)胞周期蛋白)、CDK2和CDK4等細(xì)胞周期調(diào)控因子表達(dá)影響。
正常細(xì)胞的增殖和分化依賴于細(xì)胞有序的周期活動。這一活動是由細(xì)胞周期依賴性蛋白（CDK）序慣性激活和失活所控制。CDK可被細(xì)胞周期蛋白（CyclinE、D）激活，又可被CDK抑制蛋白（CKI）所抑制。文獻(xiàn)報道，尋常型銀屑病患者皮損中細(xì)胞周期蛋白依賴性蛋白CDK4表達(dá)水平較正常人皮膚高。對角質(zhì)形成細(xì)胞過渡增殖有抑制作用的藥物可能的作用機(jī)制是通過調(diào)節(jié)CDK4和CDK2的表達(dá)來影響細(xì)胞周期。

5、對角質(zhì)形成細(xì)胞分化的影響 

采用分子生物學(xué)的方法考察藥物對角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCaT細(xì)胞）的轉(zhuǎn)谷胺酰胺酶1（transglutaminase1，TGase1）和角蛋白6（Keratin6，KRT6）表達(dá)的影響。
角質(zhì)形成細(xì)胞異常分化是銀屑病主要臨床特征之一，TGase1和KRT6是表皮細(xì)胞分化的特異性標(biāo)記蛋白。銀屑病皮損內(nèi)可見TGase1表達(dá)減少，而KRT6表達(dá)增加的情況。對角質(zhì)形成細(xì)胞異常分化有抑制作用的藥物可能作用的機(jī)制是通過對TGase1 mRNA表達(dá)和KRT6 mRNA表達(dá)的調(diào)節(jié)來實(shí)現(xiàn)的。

6、對角質(zhì)形成細(xì)胞的維A酸受體RARs、RXRα及維A酸結(jié)合蛋白CRABPs表達(dá)的影響（針對維A酸類藥物）

采用分子生物學(xué)的方法考察藥物對角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCaT細(xì)胞）維A酸受體RARs、RXRα及維A酸結(jié)合蛋白CRABPs表達(dá)的影響。文獻(xiàn)報道認(rèn)為,維A酸藥物的作用機(jī)制之一是通過與維A酸受體（RARs和RXRs）相結(jié)合而發(fā)揮活性，而細(xì)胞內(nèi)維A酸結(jié)合蛋白CRABPⅡ被公認(rèn)為維A酸唯一肯定的早期生物活性指標(biāo)，CRABPⅡ通過直接轉(zhuǎn)運(yùn)維A酸至其受體來調(diào)節(jié)維A酸活性，從而促進(jìn)上皮再生，抑制炎癥趨化，刺激KC分化。RARα、RARβ、RARγ、RXRα、CRABPⅠ和CRABPⅡ六個基因在HaCaT細(xì)胞中均有表達(dá)，RARγ表達(dá)最高，其次為RARα、RXRα，CRABPⅡ表達(dá)水平高于CRABPⅠ，RARβ僅微弱表達(dá)，但各基因之間的表達(dá)水平?jīng)]有差異。維A酸類藥物可能的作用機(jī)制是通過上述途徑發(fā)揮作用。

7、對角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT細(xì)胞環(huán)氧合酶-2（COX-2）mRNA表達(dá)的影響

采用分子生物學(xué)的方法考察藥物對由LPS（脂多糖）誘導(dǎo)的角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT細(xì)胞環(huán)氧合酶-2（COX-2mRNA高表達(dá)）趨勢的影響。在銀屑病患者外周血及皮損區(qū)可以檢測到多種與炎癥相關(guān)的細(xì)胞因子的表達(dá)。前列腺素E2（PGE2）是參與炎癥反應(yīng)的重要介質(zhì)，而環(huán)氧合酶是催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素E2的關(guān)鍵酶，其誘導(dǎo)型同工酶COX-2是71kD的膜結(jié)合蛋白，被普遍認(rèn)為與炎癥反應(yīng)相關(guān)。某些藥物可能通過抑制炎癥反應(yīng)介質(zhì)PGE2的生成而抑制銀屑病的炎癥反應(yīng)癥狀，其可能的作用機(jī)制是通過對誘導(dǎo)型同工酶COX-2的影響而發(fā)揮作用。

8、對銀屑病患者外周血淋巴細(xì)胞增殖的影響

有研究認(rèn)為，銀屑病是一種以T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)自身免疫性疾病。對T淋巴細(xì)胞增殖的影響試驗(yàn)是較為常用的治療銀屑病藥物的試驗(yàn)?zāi)Ｐ汀?br /> 含藥物培養(yǎng)液孵育淋巴細(xì)胞2天，測定450nm波長、參比波長650nm下OD值以考察藥物對淋巴細(xì)胞增殖的影響。
若藥物表現(xiàn)出對淋巴細(xì)胞增殖的抑制作用，可提示其具有抑制銀屑病的免疫性的臨床癥狀的作用。

9、對炎癥因子及中性粒細(xì)胞趨化過程的影響

考察藥物對中性粒細(xì)胞趨化細(xì)胞因子IL-8（白介素8）和MCP-3（單核細(xì)胞趨化蛋白3）的趨化性影響。銀屑病皮損中有角質(zhì)層下特征性的中性粒細(xì)胞聚集，是受化學(xué)趨化因子的吸引至此并被活化，活化的中性粒細(xì)胞又能影響表皮角質(zhì)形成細(xì)胞的生長及分化，還能影響T細(xì)胞的活化狀態(tài)，而T細(xì)胞分泌的各種細(xì)胞因子如IL-1、6、8和IFN-γ等又可影響中性粒細(xì)胞在表皮的遷移,通過生成淋巴因子影響角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn)生促炎癥介質(zhì)。
若藥物可抑制IL-8 和MCP-3，則提示該藥物可影響中性粒細(xì)胞在表皮的遷移，從而影響角質(zhì)形成細(xì)胞產(chǎn)生促炎癥介質(zhì)的過程而起到抑制炎癥的作用。