酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)技術(shù)服務(wù):各類酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)的檢測、酶聯(lián)斑點(diǎn)圖像的分析、克隆形成自動(dòng)分析、溶血斑點(diǎn)實(shí)驗(yàn)、病毒斑等。
免疫酶技術(shù)(immunoenzymatic technique) 最早應(yīng)用的免疫酶技術(shù)是免疫酶組織化學(xué)染色,即用標(biāo)記的抗體與標(biāo)本中的抗原發(fā)生特異性結(jié)合,當(dāng)加入酶的底物時(shí),在酶的作用下經(jīng)一系列生化反應(yīng)產(chǎn)生有色物質(zhì),借助光鏡作出定位判斷。目前,應(yīng)用最廣泛的是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)。該法特異性強(qiáng),敏感性高,既可檢測抗體,又能測定可溶性抗原。ELISA常采用的酶為辣根過氧化物酶(hosradish peroxidase,HRP),其底物是二氨基苯胺(DAB),底物被分解則呈棕褐色,可目測或借助酶標(biāo)儀比色。
酶聯(lián)免疫吸附測定enzyme linked immunosorbent assay(簡寫ELISA)指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上,利用抗原抗體結(jié)合專一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測方法。
ELISA是將抗原與抗體免疫反應(yīng)的特異性,同酶的高效催化作用相結(jié)合,而建立的一種非放射性標(biāo)記免疫檢測技術(shù)。可以定性或定量檢測體液中的半抗原、抗原和抗體。該技術(shù)用化學(xué)方法使酶與抗原或抗體結(jié)合生成酶標(biāo)記物,或通過免疫方法將酶與抗酶抗體相結(jié)合生成酶抗體結(jié)合物。
酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Elisa)的基本原理有三條:
(1)抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分相互吸附,并保持其免疫學(xué)活性;
(2)抗原或抗體可通過共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物,而此種酶結(jié)合物仍能保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;
(3)酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后,可根據(jù)加入第五的顏色反應(yīng)來判定是否有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,因此,可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。
酶聯(lián)免疫分析用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測物與酶連接,然后通過酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng),用于定量測定。測定的對(duì)象可以是抗體也可以是抗原。
酶聯(lián)免疫分析測定方法:主要研究方法有間接法(常用于檢測抗體)/雙抗體夾心法(常用于檢測抗原)/抗原競爭法(既可檢測抗原,亦可檢測抗體)。
1、測定抗體的間接法
a.將抗原吸附于固相載體表面,洗滌除去未吸附的抗原。
b.加抗體,保溫,形成抗原—抗體復(fù)合物洗滌除去其余的雜蛋白。
c.加酵標(biāo)抗抗體,保溫,洗滌。
d.加入底物,測定底物的降解量二抗體量。
2、測定抗原的雙抗體夾心法
首先將特異抗體的免疫球蛋白吸附在反應(yīng)板凹孔內(nèi),洗滌除去未吸附的抗體,加入含有抗原的待測溶液,保溫形成抗原—抗體復(fù)合物,洗滌除去雜蛋白后再加上述特異抗體,由于抗原是多價(jià)的并未被抗體飽和,經(jīng)保溫則可形成抗體—抗原—抗體復(fù)合物,洗滌后加酶標(biāo)抗抗體,保溫洗滌后加底物呈色,中止酶活性,比色測定抗原量。
3、測定抗原的競爭法
將含有特異抗體的免疫球蛋白吸附在兩份相同的載體(甲)和(乙)中,然后在(甲)中加入酶標(biāo)抗原和待測抗原,(乙)中只加酶標(biāo)抗原,其濃度相同于(甲)中加入的酶標(biāo)抗原的濃度,保溫洗滌后加底物呈色。待測液中未知抗原量愈多,則酶標(biāo)抗原被結(jié)合的量就愈少,有色產(chǎn)物就愈少,以此便可測出未知抗原的量,即等于(甲)與(乙)底物降解量的差值。
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