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突破腫瘤干細胞信號通路蛋白研究困局

2015-09-25
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很多威脅人類生命的惡性腫瘤存在腫瘤干細胞。腫瘤治療有效的病人,在后期出現(xiàn)復發(fā),很大程度上與腫瘤干細胞未被有效殺傷,及其耐藥性有關(guān)。越來越多的臨床科學家發(fā)現(xiàn),現(xiàn)有的腫瘤治療藥物,可能只對腫瘤細胞自身有效,而對于腫瘤干細胞無效。

近年越來越多的腫瘤臨床醫(yī)生和藥物研發(fā)企業(yè)開始啟動針對腫瘤干細胞新藥物的研發(fā)。但是很快很多研究者遇到了一個難題,腫瘤干細胞資源非常少。與腫瘤細胞系不同,腫瘤干細胞需要從腫瘤病人血液或臨床穿刺組織樣品中分離,一些樣本只能分離到10000以內(nèi)的細胞。之前,藥物開發(fā)者無法找到一種足夠靈敏的蛋白質(zhì)分析技術(shù),檢測新化合物處理的腫瘤干細胞蛋白質(zhì)表達量及修飾的改變,尤其是關(guān)鍵蛋白的修飾變化。而關(guān)鍵蛋白修飾改變通??梢苑磻?yīng)干細胞是否對新的化合物有反應(yīng),是腫瘤干細胞藥物篩選的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。

2015年1月份英國兩所全球排名前100位的著名大學曼徹斯特大學和格拉斯哥大學,聯(lián)合在國際頂尖雜志Nature發(fā)表了他們在腫瘤干細胞蛋白質(zhì)修飾變化研究方法的文章。突破了腫瘤干細胞無法有效進行蛋白質(zhì)修飾分析的瓶頸。

負責這項研究的是曼徹斯特大學血液腫瘤干細胞蛋白質(zhì)組研究中心和格拉斯哥大學血液腫瘤研究中心。

兩個中心的科學家從慢性髓性白血病病人樣本中,使用流式細胞儀分選得到CD34+CD38?原始祖細胞和CD34+CD38+定向祖細胞,使用達沙替尼和甲磺酸伊馬替尼進行處理,使用Proteinsimple 的Nanopro 1000系統(tǒng)檢測細胞裂解液中蛋白CrkL 修飾圖譜。在文中,作者指出Nanopro 1000 cIEF immunoassay technology 是一種非常有效的,可以定量出每個修飾異構(gòu)體在總CrkL蛋白中百分比,且重復性非常好技術(shù)。后續(xù)作者繼續(xù)使用了1.6ng總蛋白,檢測pS962 PTPRC/CD45和PTPRC/CD45,,發(fā)現(xiàn)CV分別在7.82,4.41,重復性非常好。

Nanopro 1000 cIEF immunoassay technology 是美國proteinsimple公司開發(fā)的,基于毛細管等電聚焦分離,使用獨創(chuàng)蛋白質(zhì)捕獲技術(shù),結(jié)合抗原抗體免疫雜交,實現(xiàn)在納升級反應(yīng)體系中,對干細胞等微量樣品進行蛋白質(zhì)修飾圖譜進行解讀。該系統(tǒng)具有全自動化,無需手工操作,可實現(xiàn)19小時內(nèi)對96個樣品進行分析的強大功能。

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